由原作動畫｢真選組暗殺篇｣為主線劇情，並另外搭配短篇搞笑日常組成。 真選組副長土方十四郎在護衛將軍的過程中，遭遇浪士偷襲，脖子被植入晶片，以至於行為御宅化，對於二次元事物無法抗拒，洽逢真選組參謀—伊東鴨太郎歸隊，野心勃勃的伊東策劃排擠土方，並與鬼兵隊聯手，企圖在列車上暗殺組長近藤勳。 土方在意識清醒時委託萬事屋保護真選組，阿銀一行人也因此意外捲入事件，並在過程中意外發現鬼兵隊河上萬齋等人的真正陰謀…